液相色谱图谱出问题，这样解决！

液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而有些问题必须通过修改操作程序来解决。本文汇总了一些关于液相色谱图谱问题的解决办法，这些办法也许能更有效的帮你解决问题。

1峰拖尾   

原因和解决方法
1、筛板阻塞
a、反冲色谱柱 

b、更换进口筛板 

c、更换色谱柱

2、色谱柱塌陷
填充色谱柱

3、干扰峰
a、使用更长的色谱柱
b、改变流动相或更换色谱柱

4、流动相PH选择错误
调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰

5、样品与填料表面的溶化点发生反应

a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂
b、更改色谱柱

2峰前延

原因和解决方法

1、柱温低
升高柱温

2、样品溶剂选择不恰当
使用流动相作为样品溶剂

3、样品过载
降低样品含量

4、色谱柱损坏
更换色谱柱

3峰分叉

原因和解决方法

1、 保护柱或分析柱污染
取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。

2、样品溶剂不溶于流动相
改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。

4峰变形

原因和解决方法

1、样品过载
减少样品载量

5早出的峰变形

原因和解决方法

1、样品溶剂选择不恰当
a、减少进样体积
b、运用低极性样品溶剂

6早出峰拖尾程度大于晚出峰

原因和解决方法

1、柱外效应
a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路）
b、使用小体积的流通池

7K’增加时，脱尾更严重

原因和解决方法

1、二级保留效应，反相模式
a、加入三乙胺（或碱性样品）
b、加入乙酸（或酸性样品）
c、加入盐或缓冲剂（或离子化样品）
d、更换一支柱子 

2、二级保留效应，正相模式
a、加入三乙胺（或碱性样品）
b、加入乙酸（或酸性样品）
c、加入水（或多官能团化合物）
d、试用另一种方法

3、二级保留效应，离子对
加入三乙胺（或碱性样品）

8酸性或碱性化合物的峰拖尾

原因和解决方法

1、缓冲不合适
a、使用浓度50-100mM的缓冲液
b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液

9额外的峰

原因和解决方法

1、样品中有其他组份

2、前一次进样的洗脱峰
a、增加运行时间或梯度斜率
b、提高流速

3、空位或鬼峰
a、检查流动相是否纯净
b、使用流动相作为样品溶剂
c、减少进样体积

10保留时间波动

原因和解决方法

1、温控不当
调好柱温

2、流动相组分变化
防止变化（蒸发、反应等）

3、色谱柱没有平衡
在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱

11保留时间不断变化

原因和解决方法

1、流速变化
重新设定流速

2、泵中有气泡
从泵中除去气泡

3、流动相选择不恰当
a、更换合适的流动相
b、选择合适的混合流动相

12基线漂移

原因和解决方法

1、柱温波动
控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器

2、流动相不均匀。（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。）
使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。

3、流通池被污染或有气体
用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用盐酸）

4、检测器出口阻塞。（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）
取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。

5、流动相配比不当或流速变化
更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。

6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时
用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。

7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成
检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂

8、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。
使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。

9、使用循环溶剂，但检测器未调整。
重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。

10、检测器没有设定在最大吸收波长处。
将波长调整至最大吸收波长处

13基线噪音（规则的）

原因和解决方法

1、在流动相、检测器或泵中有空气
流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。

2、漏液
检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。

3、流动相混合不完全
用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂

4、温度影响（柱温过高，检测器未加热）
减少差异或加上热交换器

5、在同一条线上有其他电子设备
断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。

6、泵振动
在系统中加入脉冲阻尼器

14基线噪音

原因和解决方法

1、 漏液
检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换密封。检查流通池是否漏液。

2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成
检查流动相的组成。

3、流动相各溶剂不相溶
选择互溶的流动相

4、检测器/记录仪电子元件的问题
断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。

5、系统内有气泡
用强极性溶液清洗系统

6、检测器内有气泡
清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器

7、流通池污染（即使是极少的污染物也会产生噪音。）
用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池

8、检测器灯能量不足
更换灯

9、色谱柱填料流失或阻塞
更换色谱柱

10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常
维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置

15宽峰

原因和解决方法

1、流动相组成变化
重新制备新的流动相

2、流动相流速太低
调节流速

3、漏液（特别是在柱子和检测器之间）
检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。

4、检测器设定不正确
调整设定

5、柱外效应影响
a、柱子过载
b、检测器对反应时间或池体积响应过大
c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大
d、记录仪响应时间太长

6、缓冲液浓度太低
增加浓度

7、保护柱污染或失效
更换保护柱

8、色谱柱污染或失效，塔板数较低
更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。

9、柱入口塌陷
打开柱入口，填补塌陷或更换柱子

10、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰
选择其它类型的色谱柱以改善分离效果

11、柱温过低
提高柱温。除非特殊情况，温度不宜超过75℃

12、检测器时间常数太大
使用较小的时间常数

16分离度降低

原因和解决方法

1、流动相污染或变质（引起保留时间变化）
重新配置流动相

2、保护柱或分析柱阻塞
去掉保护柱进行分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞，可进行反冲。如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏，建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在，进口可能阻塞了，更换入口处的筛板或更换色谱柱。

17所有的峰面积都太小

原因和解决方法

1、检测器衰减设定过高
减少衰减的设定

2、检测器时间常数设定太大
设定较小的时间常数

3、进样量太少
增大进样量

4、记录仪连接不当
使用正确的连接

18所有的峰面积都太大

原因和解决方法

1、检测器衰减设定过低
采取较大的衰减

2、进样过多
减少进样量

3、记录仪连接不正确
正确连接记录仪

红外、紫外、核磁、质谱、气相色谱五大仪器图谱分析使用口诀

红外分析口诀：

红外可分远中近，中红特征指纹区，

1300来分界，注意横轴划分异。

看图要知红外仪，弄清物态液固气。

样品来源制样法，物化性能多联系。

识图先学饱和烃，三千以下看峰形。

2960、2870是甲基，2930、2850亚甲峰。

1470碳氢弯，1380甲基显。

二个甲基同一碳，1380分二半。

面内摇摆720，长链亚甲亦可辨。

烯氢伸展过三千，排除倍频和卤烷。

末端烯烃此峰强，只有一氢不明显。

化合物，有键偏，～1650会出现。

烯氢面外易变形，1000以下有强峰。

910端基氢，再有一氢990。

顺式二氢690，反式移至970；

单氢出峰820，干扰顺式难确定。

炔氢伸展三千三，峰强很大峰形尖。

三键伸展二千二，炔氢摇摆六百八。

芳烃呼吸很特征，1600～1430。

1650～2000，取代方式区分明。

900～650，面外弯曲定芳氢。

五氢吸收有两峰，700和750；

四氢只有750，二氢相邻830；

间二取代出三峰，700、780，880处孤立氢

醇酚羟基易缔合，三千三处有强峰。

C－O伸展吸收大，伯仲叔醇位不同。

1050伯醇显，1100乃是仲，

1150叔醇在，1230才是酚。

1110醚链伸，注意排除酯酸醇。

若与π键紧相连，二个吸收要看准，

1050对称峰，1250反对称。

苯环若有甲氧基，碳氢伸展2820。

次甲基二氧连苯环，930处有强峰，

环氧乙烷有三峰，1260环振动，

九百上下反对称，八百左右最特征。

缩醛酮，特殊醚，1110非缩酮。

酸酐也有C－O键，开链环酐有区别，

开链强宽一千一，环酐移至1250。

羰基伸展一千七，2720定醛基。

吸电效应波数高，共轭则向低频移。

张力促使振动快，环外双键可类比。

二千五到三千三，羧酸氢键峰形宽，

920，钝峰显，羧基可定二聚酸、

酸酐千八来偶合，双峰60严相隔，

链状酸酐高频强，环状酸酐高频弱。

羧酸盐，偶合生，羰基伸缩出双峰，

1600反对称，1400对称峰。

1740酯羰基，何酸可看碳氧展。

1180甲酸酯，1190是丙酸，

1220乙酸酯，1250芳香酸。

1600兔耳峰，常为邻苯二甲酸。

氮氢伸展三千四，每氢一峰很分明。

羰基伸展酰胺I，1660有强峰；

N－H变形酰胺II，1600分伯仲。

伯胺频高易重叠，仲酰固态1550；

碳氮伸展酰胺III，1400强峰显。

胺尖常有干扰见，N－H伸展三千三，

叔胺无峰仲胺单，伯胺双峰小而尖。

1600碳氢弯，芳香仲胺千五偏。

八百左右面内摇，确定最好变成盐。

伸展弯曲互靠近，伯胺盐三千强峰宽，

仲胺盐、叔胺盐，2700上下可分辨，

亚胺盐，更可怜，2000左右才可见。

硝基伸缩吸收大，相连基团可弄清。

1350、1500，分为对称反对称。

氨基酸，成内盐，3100～2100峰形宽。

1600、1400酸根展，1630、1510碳氢弯。

盐酸盐，羧基显，钠盐蛋白三千三。

矿物组成杂而乱，振动光谱远红端。

钝盐类，较简单，吸收峰，少而宽。

注意羟基水和铵，先记几种普通盐。

1100是硫酸根，1380硝酸盐，

1450碳酸根，一千左右看磷酸。

硅酸盐，一峰宽，1000真壮观。

勤学苦练多实践，红外识谱不算难。

常见有机化合物的质谱：

1. 饱和脂肪烃

a.直链烃

直链烃显示弱的分子离子峰，

◆ 有m/z ：M-29，29，43，57，71，…CnH2n＋1系列峰(σ—断裂)

◆ 伴有m/z ：27，41，55，69，…… CnH2n-1系列较弱峰

b. 支链烃

◆分子离子峰丰度降低

c. 环烷烃

◆ 分子离子峰强度增加，会出现m/z=41，55，56，69等系列碎片离子峰。

◆ 烷基取代的环烷烃易丢失烷基，优先失去最大基团，正电荷保留在环上。

2.  烯烃

容易发生烯丙基断裂，

产生一系列27，41，55，69，…CnH2n-1峰，41常是基峰

3. 芳烃

分子离子峰强，易发生Cα-Cβ键的裂解，生成的苄基m/z91是基峰。正构烷基取代链越长，m/z91丰度越大。

若基峰比91大14n，表明苯环α碳上另有烷基取代。

会出现39，51，65，77，91，105，119，…等一系列峰。

侧链含γ-H的会产生重排离子峰，m/z=92          

4. 醇和酚

醇的分子离子峰往往观察不到，M-H有时可以观察到

饱和醇羟基的Cα－Cβ键易发生断裂，产生（31+14n）特征系列离子峰，伯醇的m/z31较强。

开链伯醇还可能发生麦氏重排，同时脱水和脱烯（M-18-28）。

酚的分子离子峰较强，出现(M-28)（-CO），(M-29)（-CHO）峰。

5. 醛、酮

直链醛、酮显示有CnH2n＋1CO为通式的特征离子系列峰，如m/z 29、43、57 ……等 。

6. 羧酸

脂肪羧酸的分子离子峰很弱，m/z  60是丁酸以上α－碳原子上没有支链的脂肪羧酸最特征的离子峰，由麦氏重排裂解产生 ；

低级脂肪酸还常有M－17（失去OH）、M－18（失去H2O）、M-45(失去CO2H)的离子峰。

7. 酯

羧酸酯进行α－裂解所产生（M-R）或（M-OR）的离子常成为质谱图中的强峰（有时为基峰）。

常见氢谱化学位移值范围：

醛氢9-10.5 ppm

芳环及苯环6-9.5 ppm

烯氢4.5-7.5 ppm

与氧原子相连的氢3.0-5.5ppm

与氮原子相连的氢2.0-3.5ppm

炔氢1.6-3.4 ppm

脂肪氢0-2.5 ppm

活泼氢：醇类0.5-5.5ppm

酚类4.0-12.0 ppm

酸类：9-13.0 ppm

氨活泼氢：酰胺5-8.5ppm

芳香氨 3.0-5.0ppm

脂肪氨0.6-3.5 ppm。

碳谱三大区：

◆  高δ值区δ>165 ppm，属于羰基和叠烯区：a.分子结构中，如存在叠峰，除叠烯中有高δ值信号峰外，叠烯两端碳在双键区域还应有信号峰，两种峰同时存在才说明叠烯存在；b.δ>190 ppm的信号，只能属于醛、酮类化合物；c.160-180 ppm的信号峰，则归属于酸、酯、酸酐等类化合物的羰基。

◆ 中δ值区δ 90-160 ppm（一般情况δ为100-150ppm）烯、芳环、除叠烯中央碳原子外的其他SP2杂化碳原子、碳氮三键碳原子都在这个区域出峰。

◆ 低δ值区δ<100 ppm，主要脂肪链碳原子区：a.与单个氧、氮、氟等杂原子相连的饱和的δ值一般处于55-95 ppm，不与氧、氮、氟等杂原子相连的饱和的δ值小于55 ppm；b.炔碳原子δ值在70-100ppm，这是不饱和碳原子的特例。

常见有机化合物的紫外吸收光谱

1.  饱和烃

饱和单键碳氢化合物只有σ电子，因而只能产生σ→σ*跃迁。由于σ电子最不容易激发，需要吸收很大的能量，才能产生σ→σ*跃迁，因而这类化合物在200nm以上无吸收。所以它们在紫外光谱分析中常用作溶剂使用，如正已烷、环乙烷、庚烷等。

2.不饱和脂肪烃

◆  含孤立不饱和键的烃类化合物。具有孤立双键或三键的烯烃或炔烃，它们都产生π→π*跃迁，但多数在200nm以上无吸收。如已烯吸收峰在171nm，乙炔吸收峰在173nm，丁烯在178nm。若烯分子中氢被助色团如-OH、-NH2、-Cl等取代时，吸收峰发生红移，吸收强度也有所增加。

◆ 含共轭体系的不饱和烃。具有共轭双键的化合物，相间的π键相互作用生成大π键，由于大π键各能级之间的距离较近，电子易被激发，所以产生了K吸收带，其吸收峰一般在217~280nm。K吸收带的波长及长度与共轭体系的长短、位置、取代基种类等有关，共轭双键越多，波长越长，甚至出现颜色。因此可据此判断共轭体系的存在情况。

◆ 芳香化合物。苯的紫外吸收光谱是由π→π*跃迁组成的三个谱带，即E1、E2、具有精细结构的B吸收带。当苯环上引入取代苯时，E2吸收带和B吸收带一般产生红移且强度加强。稠环芳烃母体吸收带的最大吸收波长大于苯，这是由于它有两个或两个以上共轭的苯环，苯环数目越多，λmax越大。例如苯（255nm）和萘（275nm）均为无色，而并四苯为橙色，吸收峰波长在460nm。并五苯为紫色，吸收峰波长为580nm。

◆  杂环化合物。在杂环化合物中，只有不饱和的杂环化合物在近紫外区才有吸收。以O、S或NH取代环戊二烯的CH2的五元不饱和杂环化合物，如呋喃、噻吩和吡咯等，既有π→π*跃迁引起的吸收谱带，又有n→π*跃迁引起的谱带。

一．气相色谱分析法概述

气液试样实在多，气相色谱把样测， 

分析灵敏响应快，常量分析全包括。 

内标外标归一法，检测热导氢焰化， 

微机处理色谱图，定量结果准度大。 

二．气相色谱仪

气相色谱仪器多，型号性能各有别， 

分析特性有异同，分离分析有特色。 

载气系统稳操作，携带样气去检测， 

压力流速勿波动，稳压稳流靠调节。 

柱分系统分类多，填充毛细全包括， 

分离试样全靠它，选择液载要正确。 

进样系统严操作，定量进样需准确， 

气体采用进样阀，液体微量用注射。 

检测系统最明确，种类型号也很多， 

热导氢焰离子化，电子捕俘双焰火。 

检测信号需琢磨，各个组分细甄别， 

响应快速能分辨，一一对应勿出错。 

放大记录有把握，谱图精细准轮廓， 

色谱峰大含量高，微机定量更准确。 

三．利用气相色谱分析法定性和定量 

气相色谱分析法，试样定性较发杂， 

操作相同峰一致，纯物对照判断它。 

气质联用好办法，色谱红外能简化， 

试样组分可判定，定性数据能表达。 

气相色谱分析法，试样定量不发杂， 

谱峰面积知多少，总量相比求得它。 

定量测定常规法，内标外标归一化， 

测定一种内外标，全部出峰归一化。 

四．归一化法

归一化法来定量，出峰不全不适当， 

全部组分看做一，百分之百来计量。 

质量分数即含量，谱峰面积先测量， 

校正因子查表得，代入公式得含量。 

五．内标法

定量可用内标法，分析简便不复杂， 

出峰组分不完全，计算仍然要方法。

内标物质物含杂，称量不准出误差，

谱峰面积测准确，质量分数准度大。

六．外标法

定量可用外标法，操作条件较复杂，

平行测定要保证，标准试剂用量大。

固定称量熟练化，称量不准出误差，

偶尔测定公式算，常规工作曲线查。

来源：实验室经理人

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